主營產品：
生化試劑，標準品,對照品，PCR試劑盒，?核酸檢測試劑盒，熒光定量檢測試劑盒，生化試劑盒?，比色法試劑盒，酶活性檢測試劑盒，ELISA試劑盒，酶聯(lián)免yi檢測試劑盒，試劑盒，ELISA試劑盒，抗體，重組蛋白，分光光度法檢測試劑盒，細胞株，原代細胞，細胞培養(yǎng)基，標準溶液產品。代理并銷售進口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產品。
新聞詳情
引物設計要遵循五條原則
日期：2024-09-20 07:30
瀏覽次數：3703
摘要：
引物是決定PCR結果的關鍵，引物設計在PCR反應中極為重要。要保證PCR反應能準確、特異、有效地對模板DNA進行擴增，通常引物設計要遵循以下幾條原則：
1、引物的長度以15-30bp為宜，一般（G+C）的含量在45-55%，Tm值高于55℃［Tm=4(G+C)+2(A+T)］。應盡量避免數個嘌呤或嘧啶的連續(xù)排列，堿基的分布應表現(xiàn)出是隨機的。
2、引物的3’端不應與引物內部有互補，避免引物內部形成二級結構，兩個引物在3’端不應出現(xiàn)同源性，以免形成引物二聚體。3’端末位堿基在很大程度上影響著Taq酶的延伸效率。兩條引物間配對堿基數少于5個，...
引物是決定PCR結果的關鍵，引物設計在PCR反應中極為重要。要保證PCR反應能準確、特異、有效地對模板DNA進行擴增，通常引物設計要遵循以下幾條原則：
1、引物的長度以15-30bp為宜，一般（G+C）的含量在45-55%，Tm值高于55℃［Tm=4(G+C)+2(A+T)］。應盡量避免數個嘌呤或嘧啶的連續(xù)排列，堿基的分布應表現(xiàn)出是隨機的。
2、引物的3’端不應與引物內部有互補，避免引物內部形成二級結構，兩個引物在3’端不應出現(xiàn)同源性，以免形成引物二聚體。3’端末位堿基在很大程度上影響著Taq酶的延伸效率。兩條引物間配對堿基數少于5個，引物自身配對若形成莖環(huán)結構，莖的堿基對數不能超過3個由于影響引物設計的因素比較多，現(xiàn)常常利用計算機輔助設計。
3、人工合成的寡聚核苷酸引物需經PAGE或離子交換HPLC進行純化。
4、引物濃度不宜偏高，濃度過高有兩個弊端：一是容易形成引物二聚體（primer-dimer），二是當擴增微量靶序列并且起始材料又比較粗時，容易產生非特異性產物。一般說來，用低濃度引物不僅經濟，而且反應特異性也較好。一般用0.25-0.5pM/μl較好。
5、 引物一般用TE配制成較高濃度的母液（約100μM），保存于-20℃。使用前取出其中一部分用ddH2O配制成10μM或20μM的工作液。