實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允?/span>DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：玉米GA21 熒光PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：詳見說明
產(chǎn)品貨號(hào)：FS-P64498
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定，具體見使用方法）。
產(chǎn)品及特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測(cè)，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
使用方法：
一、稀釋PCR陽性對(duì)照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對(duì)照。
2. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對(duì)照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?/span>10μL上步制備的PCR陽性對(duì)照的第4號(hào)（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號(hào)（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）
10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照，6個(gè)用于PCR陽性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照，并且陽性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加）
Sag 人超抗原ELISA檢測(cè)試劑盒 Sag ELISA Kit
MR 人甘露糖受體ELISA檢測(cè)試劑盒 MR ELISA Kit
Mannose 人甘露糖ELISA檢測(cè)試劑盒 Mannose ELISA Kit
LAM 人脂阿拉伯甘露聚糖ELISA檢測(cè)試劑盒 LAM ELISA Kit
CMR 人協(xié)同刺激分子受體ELISA檢測(cè)試劑盒 CMR ELISA Kit
DUTP 人脫氧尿三磷酸ELISA檢測(cè)試劑盒 DUTP ELISA Kit
OTF2A 人八聚體轉(zhuǎn)錄因子ELISA檢測(cè)試劑盒 OTF2A ELISA Kit
OTF2B 人八聚體轉(zhuǎn)錄因子ELISA檢測(cè)試劑盒 OTF2B ELISA Kit
TLa 人胸腺白血病抗原ELISA檢測(cè)試劑盒 TLa ELISA Kit
GTC 人通用轉(zhuǎn)錄復(fù)合體ELISA檢測(cè)試劑盒 GTC ELISA Kit
玉米GA21 熒光PCR檢測(cè)試劑盒beta-Amyloid(1-28) β淀粉樣肽（1-28）抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-IKK alpha/IKK beta (Ser180/Ser181) 磷酸化KB抑制蛋白激α/β抗體 規(guī)格: 0.1ml
SAMD9 SAMD9蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-Avidin/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的兔抗親和素 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-PLCG2(Tyr1217) 磷酸化磷酯Cγ2抗體 規(guī)格: 0.1mlANGEL2 ANGEL2蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
KLK10 激肽釋放10抗體 規(guī)格: 0.1mlPKA/PKAcat/PKACB 蛋白激A抗體 規(guī)格: 0.1ml
ATP6IP2 ATPH+轉(zhuǎn)運(yùn)溶體輔助蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2mlARRDC2 抑制蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Maltose Binding Protein/MBP 麥芽糖結(jié)合蛋白抗體 0.2mlKLK5 激肽釋放5抗體 規(guī)格: 0.1ml
CCL5/RANTES T細(xì)胞特異性趨化因子抗體 規(guī)格: 0.1mlNF1/Neurofibromin 1 1型神經(jīng)纖維瘤抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-chicken IgM/Cy5 Cy5標(biāo)記的兔抗雞IgM 規(guī)格: 0.1mlACADS ?；oA脫短鏈抗體 0.2ml
C5a 過敏**C5a（補(bǔ)體C5a）抗體 規(guī)格: 0.2mlLRIG1 LRIG1抗體 規(guī)格: 0.2ml
CLLD6/C13orf1 慢性**細(xì)胞白缺失基因6蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlCyclin A2/CCN1 周期素A2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-AP2M1 (Thr156) 磷酸化接相關(guān)蛋白復(fù)合體AP-2μ鏈1抗體 規(guī)格: 0.1ml
BTRC2/beta TRCP2 BTRC2蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml