操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內完全解凍，使細胞能盡快通過*易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。
6）觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
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產品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
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脯氨酸 |
25g |
FS-X020030 |
產品名稱：脯氨酸
英文名稱：脯氨酸
貨號：BH-X020030
規(guī)格：25g
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
主要功能：
（1）血管平滑肌細胞的再生能力是原發(fā)血管病變的重要因素。
（2）表達鈣通道及ICAM-1和VCAM-1，參與血管壁的炎癥反應。
（3）與血管的進展和穩(wěn)定有關。
生理變化：
（1）主動脈硬化。
（2）主動脈瘤
（3）主動脈鈣化。
基本特性：
（1）組織來源于正常大鼠大動脈組織。
（2）鑒定：肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色。
（3）原代細胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
（4）每凍存管細胞數：>5×105 cells/1ml。
（5）肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色驗證。
（6）不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、酵母。
培養(yǎng)步驟：
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
肉浸液肉湯 250(g)
Schaedler瓊脂 250(g)
緩沖蛋白胨水（BPW） 250(g)
Baird-Parker 瓊脂基礎 1000(g)
七葉苷培養(yǎng)基 10(g)
甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基 250(g)
大腸桿顯色培養(yǎng)基（ECA） 1000mL/瓶
脯氨酸溶血磷脂酶Ⅲ(LYPLA3)elisa檢測試劑盒英文名稱：LYPLA3 ELISA Kit，英文縮寫：LYPLA3，產品別名：溶血磷脂酶Ⅲ(LYPLA3)ELISA檢測試劑盒，溶血磷脂酶Ⅲ(LYPLA3)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
鞘磷脂蛋白0(MPZ)elisa檢測試劑盒英文名稱：MPZ ELISA Kit，英文縮寫：MPZ，產品別名：鞘磷脂蛋白0(MPZ)ELISA檢測試劑盒，鞘磷脂蛋白0(MPZ)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
趨化因子C-X-C-基元受體6(CXCR6)elisa檢測試劑盒英文名稱：CXCR6 ELISA Kit，英文縮寫：CXCR6，產品別名：趨化因子C-X-C-基元受體6(CXCR6)ELISA檢測試劑盒，趨化因子C-X-C-基元受體6(CXCR6)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
前列腺素I合酶(PTGIS)elisa檢測試劑盒英文名稱：PTGIS ELISA Kit，英文縮寫：PTGIS，產品別名：前列腺素I合酶(PTGIS)ELISA檢測試劑盒，前列腺素I合酶(PTGIS)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
葡萄糖-6-磷酸酶催化亞基(G6PC)elisa檢測試劑盒英文名稱：G6PC ELISA Kit，英文縮寫：G6PC，產品別名：葡萄糖-6-磷酸酶催化亞基(G6PC)ELISA檢測試劑盒，葡萄糖-6-磷酸酶催化亞基(G6PC)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
牛痘相關激酶1(VRK1)elisa檢測試劑盒英文名稱：VRK1 ELISA Kit，英文縮寫：VRK1，產品別名：牛痘相關激酶1(VRK1)ELISA檢測試劑盒，牛痘相關激酶1(VRK1)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
黏病毒耐藥蛋白1(MX1)elisa檢測試劑盒英文名稱：MX1 ELISA Kit，英文縮寫：MX1，產品別名：黏病毒耐藥蛋白1(MX1)ELISA檢測試劑盒，黏病毒耐藥蛋白1(MX1)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
囊泡單胺轉運蛋白2(VMAT2)elisa檢測試劑盒英文名稱：VMAT2 ELISA Kit，英文縮寫：VMAT2，產品別名：囊泡單胺轉運蛋白2(VMAT2)ELISA檢測試劑盒，囊泡單胺轉運蛋白2(VMAT2)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
缺陷伴血小板減少綜合征蛋白家族成員2(WASF2)elisa檢測試劑盒英文名稱：WASF2 ELISA Kit，英文縮寫：WASF2，產品別名：缺陷伴血小板減少綜合征蛋白家族成員2(WASF2)ELISA檢測試劑盒，缺陷伴血小板減少綜合征蛋白家族成員2(WASF2)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
硫代硫酸鹽轉硫酶(TST)elisa檢測試劑盒英文名稱：TST ELISA Kit，英文縮寫：TST，產品別名：硫代硫酸鹽轉硫酶(TST)ELISA檢測試劑盒，硫代硫酸鹽轉硫酶(TST)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
磷酸酶張力蛋白同源物(PTEN)elisa檢測試劑盒英文名稱：PTEN ELISA Kit，英文縮寫：PTEN，產品別名：磷酸酶張力蛋白同源物(PTEN)ELISA檢測試劑盒，磷酸酶張力蛋白同源物(PTEN)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。