培養(yǎng)步驟：
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
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原代成纖維細胞無血清培養(yǎng)基 |
100ml/500ml |
FS-X019946 |
產(chǎn)品名稱：原代成纖維細胞無血清培養(yǎng)基
產(chǎn)品規(guī)格：100ml/500ml
貨號：BH-X019946
保存溫度（℃）：2-8℃/-20℃
運輸溫度（℃）：2-8℃/-20℃
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
主要功能：
（1）血管平滑肌細胞的再生能力是原發(fā)血管病變的重要因素。
（2）表達鈣通道及ICAM-1和VCAM-1，參與血管壁的炎癥反應(yīng)。
（3）與血管的進展和穩(wěn)定有關(guān)。
生理變化：
（1）主動脈硬化。
（2）主動脈瘤
（3）主動脈鈣化。
基本特性：
（1）組織來源于正常大鼠大動脈組織。
（2）鑒定：肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色。
（3）原代細胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
（4）每凍存管細胞數(shù)：>5×105 cells/1ml。
（5）肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色驗證。
（6）不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、酵母。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細胞能盡快通過*易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。
中國藍瓊脂 250(g)
Antibiotic Brothe 肉湯 1.05273.0500MERCK默克
Count agar sugar free acc.to FIL-IDF 無糖計數(shù)瓊脂 1.10878.0500MERCK默克
Lactose broth 乳糖肉湯 1.07661.0500MERCK默克
OF basal medium acc.to HUGH and LEIFSON OF基礎(chǔ)肉湯 1.10282.0500MERCK默克
Standard nutrien
原代成纖維細胞無血清培養(yǎng)基白抗原DR(HLA-DR)elisa檢測試劑盒英文名稱：HLA-DR ELISA Kit，英文縮寫：HLA-DR，產(chǎn)品別名：白抗原DR(HLA-DR)ELISA檢測試劑盒，白抗原DR(HLA-DR)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
阿拉伯半乳糖蛋白(AGPs)elisa檢測試劑盒英文名稱：AGPs ELISA Kit，英文縮寫：AGPs，產(chǎn)品別名：阿拉伯半乳糖蛋白(AGPs)ELISA檢測試劑盒，阿拉伯半乳糖蛋白(AGPs)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
白介素21(IL-21)elisa檢測試劑盒英文名稱：IL-21 ELISA Kit，英文縮寫：IL-21，產(chǎn)品別名：白介素21(IL-21)ELISA檢測試劑盒，白介素21(IL-21)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
β-防御素3(β-BD-3)elisa檢測試劑盒英文名稱：β-BD-3 ELISA Kit，英文縮寫：β-BD-3，產(chǎn)品別名：β-防御素3(β-BD-3)ELISA檢測試劑盒，β-防御素3(β-BD-3)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
α輔肌動蛋白3(ACTN-3)elisa檢測試劑盒英文名稱：ACTN-3 ELISA Kit，英文縮寫：ACTN-3，產(chǎn)品別名：α輔肌動蛋白3(ACTN-3)ELISA檢測試劑盒，α輔肌動蛋白3(ACTN-3)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
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P糖蛋白/滲透性糖蛋白(P-gp)elisa檢測試劑盒英文名稱：P-gp ELISA Kit，英文縮寫：P-gp，產(chǎn)品別名：P糖蛋白/滲透性糖蛋白(P-gp)ELISA檢測試劑盒，P糖蛋白/滲透性糖蛋白(P-gp)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
G蛋白偶聯(lián)受體109A(GPR109A)elisa檢測試劑盒英文名稱：GPR109A ELISA Kit，英文縮寫：GPR109A，產(chǎn)品別名：G蛋白偶聯(lián)受體109A(GPR109A)ELISA檢測試劑盒，G蛋白偶聯(lián)受體109A(GPR109A)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
c-myc癌基因產(chǎn)物(c-myc)elisa檢測試劑盒英文名稱：c-myc ELISA Kit，英文縮寫：c-myc，產(chǎn)品別名：c-myc癌基因產(chǎn)物(c-myc)ELISA檢測試劑盒，c-myc癌基因產(chǎn)物(c-myc)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
B生長因子(BCGF)elisa檢測試劑盒英文名稱：BCGF ELISA Kit，英文縮寫：BCGF，產(chǎn)品別名：B生長因子(BCGF)ELISA檢測試劑盒，B生長因子(BCGF)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
Ⅱ型前膠原N端前肽(PⅡNP)elisa檢測試劑盒英文名稱：PⅡNP ELISA Kit，英文縮寫：PⅡNP，產(chǎn)品別名：Ⅱ型前膠原N端前肽(PⅡNP)ELISA檢測試劑盒，Ⅱ型前膠原N端前肽(PⅡNP)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。