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iPS細胞培養(yǎng)添加劑（配套） |
5ml（復溶） |
FS-X019926 |
產品名稱：iPS細胞培養(yǎng)添加劑（配套）
產品規(guī)格：5ml（復溶）
貨號：BH-X019926
保存溫度（℃）：/-20℃
運輸溫度（℃）：/-20℃(干冰)
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
主要功能：
（1）血管平滑肌細胞的再生能力是原發(fā)血管病變的重要因素。
（2）表達鈣通道及ICAM-1和VCAM-1，參與血管壁的炎癥反應。
（3）與血管的進展和穩(wěn)定有關。
生理變化：
（1）主動脈硬化。
（2）主動脈瘤
（3）主動脈鈣化。
基本特性：
（1）組織來源于正常大鼠大動脈組織。
（2）鑒定：肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色。
（3）原代細胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
（4）每凍存管細胞數：>5×105 cells/1ml。
（5）肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色驗證。
（6）不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、酵母。
培養(yǎng)步驟：
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
多粘素B培養(yǎng)基 250(g)
Antibiotic agar No.5 GROVE and RANDALL medium No.5瓊脂5號 1.05271.0500MERCK默克
Differential reinforced clostridial broth 梭狀芽孢桿鑒別加強肉湯 1.11699.0500MERCK默克
KING agar B base（Dank Standard）ＫＩＮＤ 瓊脂Ｂ基礎 1.10991.0500MERCK默克
MUELLER-HINTON br
iPS細胞培養(yǎng)添加劑（配套）Slit同源物1(Slit1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforSlitHomolog1(Slit1) 規(guī)格：48T/96T 進口、國產
Ⅴ型膠原α2(COL5α2)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforCollagenTypeVAlpha2(COL5a2) 規(guī)格：48T/96T 進口、國產
尿溶蛋白3B(UPK3B)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforUroplakin3B(UPK3B) 規(guī)格：48T/96T 進口、國產
誘導型一氧化氮合酶(NOS2)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforNitricOxideSynthase2,Inducible(NOS2) 規(guī)格：48T/96T 進口、國產
白介素3(IL3)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforInterleukin3(IL3) 規(guī)格：48T/96T 進口、國產
血管緊張素轉化酶2(ACE2)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforAngiotensinIConvertingEnzyme2(ACE2) 規(guī)格：48T/96T 進口、國產
5羥色胺轉運蛋白(SERT)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforSerotoninTransporter(SERT) 規(guī)格：48T/96T 進口、國產
滑行蛋白β(TXLNβ)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforTaxilinBeta(TXLNb) 規(guī)格：48T/96T 進口、國產
興奮性氨基酸轉運蛋白4(EAAT4)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforExcitatoryAminoAcidTransporter4(EAAT4) 規(guī)格：48T/96T 進口、國產
補體成分7(C7)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforComplementComponent7(C7) 規(guī)格：48T/96T 進口、國產
操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內完全解凍，使細胞能盡快通過*易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。
6）觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。