公司細胞廣泛用于國內(nèi)院校的細胞生物學研究，作為實驗項目研究。
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產(chǎn)品名稱 |
角膜基質(zhì)細胞 |
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規(guī)格 |
5×105 |
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貨號 |
FS-X019907 |
產(chǎn)品名稱：角膜基質(zhì)細胞
產(chǎn)品規(guī)格：5×105
貨號：BH-X019907
產(chǎn)品類型：原代細胞
單位：T25/瓶
提供細胞鑒定：提供**熒光鑒定報告
保存培養(yǎng)溫度（℃）：37
運輸溫度（℃）：常溫
培養(yǎng)操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學檢測。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為玻璃**，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
細胞處理方法：
以下細胞處理方法及細胞說明書僅供參考，具體操作還需要根據(jù)到貨時細胞密度，細胞生長狀態(tài)等具體情況，酌情處理，如需要更詳細技術指導，請及時電話或郵件聯(lián)系。
一．貼壁細胞
客戶接收到細胞，用75%的酒精（建議配制75%酒精的水是過的）培養(yǎng)瓶外部。
肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張）。
顯微鏡觀察細胞，當細胞融匯至80%左右（可以傳代的情況下），細胞應該在37度培養(yǎng)箱預溫1-2h后再做處理。如未達到細胞傳代密度，培養(yǎng)瓶應預留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細胞,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
1000rpm,5min離心，重懸細胞。換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃,5%CO2 培養(yǎng)。
二．懸浮細胞
1. 接收到細胞，用75%的酒精（建議配制75%酒精的水是過的）培養(yǎng)瓶外部。
2. 肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張）。
3. 嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4. 將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒）。
5. 1000rpm,5min離心，重懸細胞。 換新的細胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基，37℃,5%CO2 培養(yǎng)。
Eosin Methylene Blue Agar, Levine
沙門氏顯色培養(yǎng)基 用于鑒別包括傷寒桿在內(nèi)的沙門氏1000ml
巰基醋酸鹽培養(yǎng)基(Brewer) (CM0023) Oxoid
Crossley Milk Medium/Crossley 牛奶培養(yǎng)基 Oxoid500G
卡里-布萊爾轉(zhuǎn)運培養(yǎng)基 (CM0519) Oxoid
血液增培養(yǎng)基 250用于從血液中分離病原
支原體培養(yǎng)基基礎 250用于培養(yǎng)支原體的基礎培養(yǎng)基
角膜基質(zhì)細胞基質(zhì)金屬蛋白酶26(MMP26)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforMatrixMetalloproteinase26(MMP26) 規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)
巨噬炎性蛋白1β(MIP1β)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforMacrophageInflammatoryProtein1Beta(MIP1b) 規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)
鈉/鉀離子轉(zhuǎn)運ATP酶β1肽(ATP1β1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforATPase,Na+/K+TransportingBeta1Polypeptide(ATP1b1) 規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)
促凋亡蛋白1(APOPT1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforApoptogenic1(APOPT1) 規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)
神經(jīng)肽S(NPS)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforNeuropeptideS(NPS) 規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)
干擾素α8(IFNα8)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforInterferonAlpha8(IFNa8) 規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)
激肽釋放酶5(KLK5)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforKallikrein5(KLK5) 規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)
滲透性糖蛋白(Pgp)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforPermeabilityGlycoprotein(Pgp) 規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)
核糖體蛋白S6激酶β1(RPS6Kβ1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforRibosomalProteinS6KinaseBeta1(RPS6Kb1) 規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)
羧肽酶A4(CPA4)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforCarboxypeptidaseA4(CPA4) 規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)