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產品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
兔頜下腺上皮細胞 |
詳見說明書 |
FS-016486 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
主要功能:
(1)血管平滑肌細胞的再生能力是原發(fā)血管病變的重要因素。
(2)表達鈣通道及ICAM-1和VCAM-1,參與血管壁的炎癥反應。
(3)與血管的進展和穩(wěn)定有關。
生理變化:
(1)主動脈硬化。
(2)主動脈瘤
(3)主動脈鈣化。
基本特性:
(1)組織來源于正常大鼠大動脈組織。
(2)鑒定:肌動蛋白,alpha-SMA和Desmin熒光染色。
(3)原代細胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
(4)每凍存管細胞數:>5×105 cells/1ml。
(5)肌動蛋白,alpha-SMA和Desmin熒光染色驗證。
(6)不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、酵母。
培養(yǎng)步驟:
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro(pCDHCMVMCSEF1Puro)(60908-1363) Stetteria medium
人幽門螺旋IgG(Hp-IgG)ELISA Kit pDdGal-15(pDdGal15)
FTA血片DNAout(見關聯產品) 小鼠胰島素受體β(ISR-β)ELISA Kit
pMCSG34B (linearized) 一站式TA克隆試劑盒(A)
丙烯酰胺 pSF-pA-MinProm-RLuc
大鼠凋亡誘導因子(AIF)ELISA Kit Formalin-Acetic Acid Solution
Clostridium sp. La1 medium 雞促卵泡素(FSH)ELISA Kit
pAG426GPD-ccdB-EGFP(pAG426GPDccdBEGFP) Rhodobacter changlensis medium
人神經特異烯醇化酶(NSE)ELISA Kit pDsRed-Express2-C1(pDsRedExpress2C1)
SK-BR-3 [SKBR3]細胞株 小鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA Kit
pLenti-C-tRFP(pLentiCtRFP) 脈沖電泳Marker(Lambda LadderPFG)(見關聯產品)
新生溶液 pPIC3
人注意缺陷多巴胺D4受體基因多態(tài)PCR檢測試劑盒 Lilies結晶紫溶液(Crystal Violet, Lilies Solution)
兔頜下腺上皮細胞苯丙氨酯 英文名稱:Phenprobamate 規(guī)格::50mg 保存::-20℃,避光
咯萘啶 英文名稱:Malaridine phosphate 規(guī)格::100mg 保存::-20℃,避光
硫噴妥 英文名稱:Thiopental 規(guī)格::100mg 保存::-20℃,避光
卡馬西平 英文名稱:C Masi Bing 規(guī)格::100mg 保存::-20℃,避光
N-甲基嗪 英文名稱:N- methyl piperazine 規(guī)格::50mg 保存::-20℃,避光
6-甲氧基-2-萘乙酮 英文名稱:6- methoxy -2- acetonaphthone 規(guī)格::50mg 保存::-20℃,避光
甲苯咪唑 英文名稱:Mebendazole 規(guī)格::50mg 保存::-20℃,避光
甲氨蝶呤 英文名稱:Methotrexate 規(guī)格::100mg 保存::-20℃,避光
過氧苯甲酰 英文名稱:Benzoyl peroxide 規(guī)格::100mg 保存::-20℃,避光
10%A晶型甲苯咪唑 英文名稱:10%A crystal type of mebendazole 規(guī)格::50mg 保存::-20℃,避光
格列本脲 英文名稱:Glibenclamide 規(guī)格::50mg 保存::-20℃,避光
操作要點:
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內完全解凍,使細胞能盡快通過*易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養(yǎng)。
6)觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。