實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
產(chǎn)品及特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設計的專一性引物，與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：艱難梭菌(TCD-A)定性PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品貨號：FS-P64254
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機型決定，具體見使用方法）。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法：
一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應（20 μL體系，在樣品制備室進行）
10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設置數(shù)量相應增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）
細a-淀粉酶（a-AMYLASE）活性CNPG3比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
7-O-（三乙基硅基）-10-去乙酰巴卡丁III 7-O-(Triethylsilyl)-10-deacetyl Baccatin III 115437-18-8 質量規(guī)格：美國進口
葛根素(標準品) Puerarin 3681-99-0 質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品
麥迪霉素 Midecamycin 35457-80-8 質量規(guī)格：美國進口
大量全血基因組DNA純化試劑盒（20毫升全血） 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次
磷酸哌喹（標準品） Piperaquine phosphate 85547-56-4 質量規(guī)格：含量測定
picric acid-orange G solution 溶液 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：500毫升
通用型蘋果酸脫氫酶（MDH）活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
父母印記（IMPRINTING）基因克隆技術試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：5次
氟西汀琥珀酰胺酸 Fluoxetine Succinamic Acid 1026723-45-4 質量規(guī)格：美國進口
體液輔酶Q含量比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
飲料乙酸激酶法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
電鏡組織基吡啶固著液（2,4,6-Trimethylpyridine puriss） 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：50毫升
HA（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠） 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：100微升
1,8-二碘蒽(>98.0%(GC)) 1,8-Diiodoanthracene 189105-78-0 質量規(guī)格：>98.0%(GC)
動物細胞/組織高質純化線粒體分離試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次
艱難梭菌(TCD-A)定性PCR檢測試劑盒NANOGP8 干細胞轉錄因子NANOGP8抗體 規(guī)格: 0.2mlGoat Anti-human IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的羊抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml
GDIA2/ARHGDIB 瘤轉移抑制基因GDIA2抗體 規(guī)格: 0.1mlAATK AATK細胞凋亡關聯(lián)酪氨酸激酶抗體 0.2ml
SSBP2 抑基因SSDP2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Caspase-6 (CT) 半胱胺酸蛋白酶蛋白-6抗體（C端） 規(guī)格: 0.1ml
Endo G 核酸內切酶G抗體 規(guī)格: 0.1ml
SEPT6 細胞分化蛋白SEPT6抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-Monkey IgG/Cy5.5 Cy5.5標記的兔抗猴IgG 規(guī)格: 0.1ml
TP/thymidine phosphorylase 胸苷磷酸化酶抗體 規(guī)格: 0.1ml
UGCGL2 二磷酸葡萄糖神經(jīng)酰胺葡萄糖基轉移酶2抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-GSK3 Beta (Tyr216) 磷酸化葡萄糖合成激酶3β抗體 規(guī)格: 0.1ml
CIAPIN1 細胞因子誘導凋亡抑制因子1 規(guī)格: 0.2ml
CAP57 中性粒細胞殺蛋白BP30抗體 規(guī)格: 0.2ml
Semaphorin 3B 導向蛋白3B抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-JNK1/2/3(Thr183+Thr185) 磷酸化氨基末端激酶1/2/3抗體 規(guī)格: 0.1ml
DAP3 死亡相關蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml
TIM4 T細胞膜蛋白4抗體 規(guī)格: 0.1ml