實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶(hù)盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào)；
3）客戶(hù)盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi)，探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
產(chǎn)品及特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，用戶(hù)只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計(jì)的專(zhuān)一性引物，與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測(cè)，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱(chēng)：禽流感病毒H7亞型(AIV-H7)定性PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品貨號(hào)：FS-P64196
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定，具體見(jiàn)使用方法）。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
使用方法：
一、稀釋PCR陽(yáng)性對(duì)照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）。可以用10μL上步制備的PCR陽(yáng)性對(duì)照的第4號(hào)（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬(wàn)拷貝）或第5號(hào)（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬(wàn)拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）
10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照，6個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加）
酵母F型ATP酶（F type ATPase）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次
牛血清白蛋白(BSA);牛血清白蛋白組分五 Albumin(bovine fraction V);BSA 9048-46-8 質(zhì)量規(guī)格：Purity>98%,分子生物學(xué)級(jí)
牛磺膽酸-3-硫酸酯二鈉鹽 Taurocholate-3-sulfate,disodium salt 64936-81-8 質(zhì)量規(guī)格：>90%,BR
血液乙醇脫氫酶總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次
動(dòng)物多核白細(xì)胞分離試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10次
氟甲喹 Flumequine 42835-25-6 質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR，進(jìn)分
可可堿（標(biāo)準(zhǔn)品） Theobromine 83-67-0 質(zhì)量規(guī)格：≥99%，標(biāo)準(zhǔn)品
羥脯氨酸（HYP）高效液相色譜定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次
N-琥珀酰亞胺基-7-甲氧基香豆素-3-羧酸酯(>98.0%(HPLC)(N)) N-Succinimidyl 7-Methoxycoumarin-3-carboxylate 150321-92-9 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(N)
正壬烷(standard for GC,≥99.5%(GC)) Nonane 111-84-2 質(zhì)量規(guī)格：standard for GC,≥99.5%(GC)
鉍試劑III(>99%,BR) Bismuth(III) nitrate pentahydrate 10035-06-0 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR
血液谷胱甘肽（GLUTATHIONE）總濃度比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：50次
AP底物pNPP緩沖溶液 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：100毫升
腺苷-5單磷酸(進(jìn)口原裝) AMP 61-19-8 質(zhì)量規(guī)格：>99,ALFA原裝
萘酚AS-D-乙酸酯 Naphthol AS-D acetate 528-66-5 質(zhì)量規(guī)格：0.98
植物染色質(zhì)沉淀分析（CHIP）試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10次
禽流感病毒H7亞型(AIV-H7)定性PCR檢測(cè)試劑盒KIZUNA/C20orf19 20號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框19抗體 規(guī)格: 0.2mlCD36/PAS-4 CD36抗體 規(guī)格: 0.1ml
PSAP/PAP 前列酸性磷酸酶抗體 規(guī)格: 0.1mlEAAT3 膠質(zhì)細(xì)胞谷氨酸運(yùn)載蛋白3抗體(神經(jīng)/上皮細(xì)胞谷氨酸運(yùn)載蛋白) 規(guī)格: 0.1ml
UEVLD/UEV3 泛素結(jié)合酶E2樣蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlSLC27A2/ACSVL1 鏈脂肪酸輔酶A連接酶抗體 規(guī)格: 0.2ml
CD22/BLCAM B細(xì)胞粘附分子CD22抗體 規(guī)格: 0.1mlC13orf38/LOC728591 13號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框38抗體 規(guī)格: 0.2ml
FANCD2 FANCD2抗體 規(guī)格: 0.1mlNucleoprotein TPR 核蛋白易位啟動(dòng)子區(qū)域TPR抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-p63 (Ser455) 磷酸化P63瘤抑制基因抗體 規(guī)格: 0.1mlPKC alpha 蛋白激酶C α抗體 規(guī)格: 0.2ml
GLP-1R 胰高糖素樣肽-1受體抗體 規(guī)格: 0.1mlFLIP/c FLIP 凋亡調(diào)節(jié)基因之一抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-DAG1 (Tyr892) 磷酸化肌萎相關(guān)蛋白DAG1抗體 規(guī)格: 0.1ml
CERKL 視網(wǎng)膜色素變性蛋白26抗體 規(guī)格: 0.2ml
HDAC7 組蛋白去乙?；?抗體 規(guī)格: 0.1ml
PHLP 瘤抑制基因PHLPP抗體 規(guī)格: 0.2ml
Donkey Anti-Goat IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的驢抗羊IgG 規(guī)格: 0.1ml
BNP/proBNP 腦納素前體抗體 規(guī)格: 0.1ml
LPL/PLASTIN2 脂蛋白脂酶抗體 規(guī)格: 0.1ml
Septin 3 神經(jīng)元特異性蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml
FRK/PTK5 胃腸道相關(guān)酪氨酸激酶抗體（蛋白酪氨酸激酶5） 規(guī)格: 0.2ml