腸道沙門氏菌染料法熒光定量PCR試劑盒說明書

1、試劑盒簡介貨為了適應(yīng)腸道沙門氏菌染料法熒光定量PCR試劑盒快速檢測和疫病研究的需要，本公司參照 OIE 國際標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的引物序列，經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)及系統(tǒng)優(yōu)化，開發(fā)生產(chǎn)了本試劑盒。應(yīng)用本試劑盒進(jìn)行檢測具有快速、靈敏、特異、準(zhǔn)確、安全操作簡單、應(yīng)用廣泛和高通量檢測等特點(diǎn)及優(yōu)點(diǎn)。

2、試劑盒組成:試劑盒組成包括核酸提取試劑和核酸擴(kuò)增試劑，具體組成參見表 1：s

表 1：試劑盒組成（50test/盒）

樣本處理及要求：

1.血清：全血標(biāo)本請于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2.  血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3.  組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

4.  細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

試劑盒組成及試劑配制：

1. 酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔）。 

2. 標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：2瓶（凍干品）。

3. 樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶

4. 生物素標(biāo)記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6. 生物素標(biāo)記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。 

9. 濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。 

10. 終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

樣本：血清 血漿 組織勻漿等液體樣本

標(biāo)記物：血清 血漿 組織勻漿等

應(yīng)用：僅用科研實(shí)驗(yàn)檢測定量，定性檢

檢測方法：夾心法

技術(shù)要求：全程按說明書步驟檢測，操作規(guī)范，專業(yè)，儀器設(shè)備齊全。

規(guī)格：48t/96t 

性狀：液體 

運(yùn)輸方式：快遞發(fā)貨 

有效期：6個(gè)月品

特點(diǎn)：靈敏性高，---性，吸附均勻，吸附性好，回收利用率高，是一款可以讓您放心選購的產(chǎn)品。

使用范圍：此產(chǎn)品供科研實(shí)驗(yàn)使用，不得用于---。

用途：用于測定人血清、血漿、組織及相關(guān)液體樣本中的含量或活性。

注：本公司提供試劑盒免費(fèi)代測服務(wù)。需要其他檢測試劑盒請咨詢銷售人員。