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逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)優(yōu)化及注意事項(xiàng)
日期：2024-09-20 07:42
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摘要：
逆轉(zhuǎn)錄（reverse transcription）是以 RNA 為模板合成 DNA 的過(guò)程，即 RNA 指導(dǎo)下的 DNA 合成。優(yōu)化及注意事項(xiàng)：
1、逆轉(zhuǎn)錄 PCR 時(shí)，提取 RNA 是關(guān)鍵，需分離高質(zhì)量 RNA（純度和完整性）。
2、整個(gè)操作過(guò)程需使用去 RNA 酶的槍頭、EP 管等耗材。
3、 逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程中要謹(jǐn)防 RNA 酶的污染，加入 RNA 酶抑制劑。
4、 為了防止非特異性擴(kuò)增，必須設(shè)陰性對(duì)照。
5、逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)應(yīng)全程在冰上操作完成，操作過(guò)程應(yīng)避免 RNase 污染。
6、 提高...
逆轉(zhuǎn)錄（reverse transcription）是以 RNA 為模板合成 DNA 的過(guò)程，即 RNA 指導(dǎo)下的 DNA 合成。優(yōu)化及注意事項(xiàng)：
1、逆轉(zhuǎn)錄 PCR 時(shí)，提取 RNA 是關(guān)鍵，需分離高質(zhì)量 RNA（純度和完整性）。
2、整個(gè)操作過(guò)程需使用去 RNA 酶的槍頭、EP 管等耗材。
3、 逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程中要謹(jǐn)防 RNA 酶的污染，加入 RNA 酶抑制劑。
4、 為了防止非特異性擴(kuò)增，必須設(shè)陰性對(duì)照。
5、逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)應(yīng)全程在冰上操作完成，操作過(guò)程應(yīng)避免 RNase 污染。
6、 提高逆轉(zhuǎn)錄預(yù)熱溫度（也可根據(jù)相應(yīng)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行調(diào)整）。
7、 減少基因組 DNA 污染，可使用去基因組的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒。